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試劑盒使用過程中可能出現的問題和解決方法
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常見問題及處理

“貝喜@”唐氏綜合征產前篩查系統實驗操作注意事項

藍色字體為重點注意的問題,並且篩查實驗必須完全基於孕母血清為中孕期(14~20周)的血清,並保證實驗中的使用的一切儀器安全準確時,才可參考以下問題。以下問題的最終解釋權歸“復旦張江”所有,僅以以下問題引起實驗操作注意,並進行交流。

問題和現象

原因

解決方法

一、








1 、加試劑造成污染

加液時最好懸空加入(高出板孔面 0.5cm )

2 、試劑、樣品使用前未能平衡

使用前試劑樣品置室溫平衡 15 分鐘左右

3 、恒溫箱溫度不足 37℃ (或水浴鍋溫度不足 37℃ )

孵育反應期間檢察並控制好溫度

4 、移液器吸量不足,吸頭內壁掛液太多或本身吸頭不清潔

校正移液器,吸頭要配套,每次裝吸頭要牢固,吸頭一次性使用

5 、孵育反應時間不足

準確計時

6 、人工洗板時衝擊力太大,洗滌液浸泡時間太長,

洗滌次數增加

減少洗滌衝擊力,按說明書要求的時間浸泡,準確記住洗滌次數,並戴手套洗板

7 、試劑滴加量不足或順序顛倒

加顯色液時,先加顯色劑 A ,後加顯色劑 B ,注意加入量的準確性

8 、顯色劑反應時間不足

試劑盒顯色反應時間精確 30 分鐘

9 、顯色反應避光不佳

使用專門的暗格進行顯色反應

二、





1 、加試劑造成污染

加液時懸空加入(高出板孔 0.5cm )

2 、樣品體積多少不一,加樣時間的長的短

重複某一樣品盡可能與第一次接近,平行的孔內的加樣操作應保持一致

3 、樣本加入後未混勻

加完樣後要輕輕振盪並在桌上做圓周運動以混勻

4 、測量波長不對

按說明書嚴格操作

5 、酶標儀重複性差

校對酶標儀

6 、操作過程中個別孔液體外濺

穩拿穩放,小心混勻,防止外濺

7 、不同批號試劑盒中組分混淆

不同批號試劑不能混用

8 、瓶蓋相互交叉使用

不同組分的瓶蓋不能混用(特別是標準品)

9 、洗滌不正確

儘量用洗板機洗滌。手洗時應戴上手套,儘量避免交叉污染,

10 、孵育條件不一致(如:一次用水浴,一次用恒溫箱)

水浴溫育較恒溫箱顯色深,最好採用水浴,恒溫箱的溫度應控制在 37℃

11 、其它雜物掉入孔內、不慎多加或少加試劑

用記號筆圈上便於分析、多加時顯色深,少加則淺

12 、操作人員不一致

最好是一人操作或熟練人員操作

13 、加樣量不一致

盡可能使用同一移液器和裝緊吸頭

14 、加試劑前未混勻

加試劑前請混勻試劑

三、












1 、終止液當顯色劑使用或終止液誤作洗滌液稀釋

每次配置時均應看清標籤標明物質

2 、洗滌液配置時有誤

仔細閱讀說明書,按說明書配置

3 、漏加抗體或酶

注意不要漏加

4 、試劑未平衡,產生氣泡

從冰箱中取出試劑至少平衡 15min 再進行實驗

5 、試劑過有效日期

更換試劑盒

6 、試劑失效(有效期內)

請查看試劑的有效期限,與我公司聯繫

7 、讀數與理論值相差較大

對試劑和血清進行稀釋時可能稀釋的濃度不對,請檢查稀釋濃度

8 、加樣時孔內產生氣泡

使用加樣槍加樣時,請僅使用第一檔,以防止氣泡產生

四、






1 、顯色劑受光照時間較長,或污染

使用中注意避光,避免交叉污染

2 、整批樣品放置時間過長,樣品污染

樣品保持新鮮,或低溫保存,防止污染

3 、洗滌不充分,樣品中其它成分殘留,或酶殘留

按說明書充分洗滌

4 、酶結合物反應時間或底物顯色時間超過較多

按說明書所規定的時間內操作

5 、加量過多

加酶前檢察移液器調節是否準確

6 、吸頭重複使用,未洗淨或消毒不完全而用於加酶或顯色劑

吸頭盡一次性使用

五、




1 、手工洗板失敗,洗液在洗板時被吸頭污染

加液時最好懸空加入(高出板孔 0.5cm )

2 、洗板後未立即進行下一步操作

洗板後立即進行下一步操作,不要中斷實驗去從事其它事情

3 、板孔內試劑時未能充分混勻(如:顯色過程)

加完樣後要輕輕振盪並在桌上做圓周運動以混勻


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