問題和現象 |
原因
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解決方法
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一、
顯
色
淡
靈
敏
度
低
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1 、加試劑造成污染
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加液時最好懸空加入(高出板孔面 0.5cm )
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2 、試劑、樣品使用前未能平衡
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使用前試劑樣品置室溫平衡 15 分鐘左右
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3 、恒溫箱溫度不足 37℃ (或水浴鍋溫度不足 37℃ )
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孵育反應期間檢察並控制好溫度
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4 、移液器吸量不足,吸頭內壁掛液太多或本身吸頭不清潔
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校正移液器,吸頭要配套,每次裝吸頭要牢固,吸頭一次性使用
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5 、孵育反應時間不足
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準確計時
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6 、人工洗板時衝擊力太大,洗滌液浸泡時間太長,
洗滌次數增加
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減少洗滌衝擊力,按說明書要求的時間浸泡,準確記住洗滌次數,並戴手套洗板
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7 、試劑滴加量不足或順序顛倒
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加顯色液時,先加顯色劑 A ,後加顯色劑 B ,注意加入量的準確性
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8 、顯色劑反應時間不足
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試劑盒顯色反應時間精確 30 分鐘
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9 、顯色反應避光不佳
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使用專門的暗格進行顯色反應
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二、
重
複
性
差
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1 、加試劑造成污染
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加液時懸空加入(高出板孔 0.5cm )
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2 、樣品體積多少不一,加樣時間的長的短
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重複某一樣品盡可能與第一次接近,平行的孔內的加樣操作應保持一致
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3 、樣本加入後未混勻
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加完樣後要輕輕振盪並在桌上做圓周運動以混勻
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4 、測量波長不對
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按說明書嚴格操作
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5 、酶標儀重複性差
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校對酶標儀
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6 、操作過程中個別孔液體外濺
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穩拿穩放,小心混勻,防止外濺
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7 、不同批號試劑盒中組分混淆
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不同批號試劑不能混用
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8 、瓶蓋相互交叉使用
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不同組分的瓶蓋不能混用(特別是標準品)
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9 、洗滌不正確
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儘量用洗板機洗滌。手洗時應戴上手套,儘量避免交叉污染,
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10 、孵育條件不一致(如:一次用水浴,一次用恒溫箱)
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水浴溫育較恒溫箱顯色深,最好採用水浴,恒溫箱的溫度應控制在 37℃
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11 、其它雜物掉入孔內、不慎多加或少加試劑
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用記號筆圈上便於分析、多加時顯色深,少加則淺
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12 、操作人員不一致
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最好是一人操作或熟練人員操作
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13 、加樣量不一致
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盡可能使用同一移液器和裝緊吸頭
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14 、加試劑前未混勻
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加試劑前請混勻試劑
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三、
出
現
白
板
或
吸
光
度
值
很
低
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1 、終止液當顯色劑使用或終止液誤作洗滌液稀釋
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每次配置時均應看清標籤標明物質
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2 、洗滌液配置時有誤
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仔細閱讀說明書,按說明書配置
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3 、漏加抗體或酶
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注意不要漏加
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4 、試劑未平衡,產生氣泡
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從冰箱中取出試劑至少平衡 15min 再進行實驗
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5 、試劑過有效日期
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更換試劑盒
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6 、試劑失效(有效期內)
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請查看試劑的有效期限,與我公司聯繫
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7 、讀數與理論值相差較大
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對試劑和血清進行稀釋時可能稀釋的濃度不對,請檢查稀釋濃度
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8 、加樣時孔內產生氣泡
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使用加樣槍加樣時,請僅使用第一檔,以防止氣泡產生
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四、
全
部
都
有
色
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1 、顯色劑受光照時間較長,或污染
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使用中注意避光,避免交叉污染
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2 、整批樣品放置時間過長,樣品污染
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樣品保持新鮮,或低溫保存,防止污染
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3 、洗滌不充分,樣品中其它成分殘留,或酶殘留
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按說明書充分洗滌
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4 、酶結合物反應時間或底物顯色時間超過較多
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按說明書所規定的時間內操作
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5 、加量過多
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加酶前檢察移液器調節是否準確
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6 、吸頭重複使用,未洗淨或消毒不完全而用於加酶或顯色劑
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吸頭盡一次性使用
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五、
出
現
花
板 |
1 、手工洗板失敗,洗液在洗板時被吸頭污染
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加液時最好懸空加入(高出板孔 0.5cm )
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2 、洗板後未立即進行下一步操作
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洗板後立即進行下一步操作,不要中斷實驗去從事其它事情
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3 、板孔內試劑時未能充分混勻(如:顯色過程)
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加完樣後要輕輕振盪並在桌上做圓周運動以混勻
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