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试剂盒使用过程中可能出现的问题和解决方法
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常见问题及处理

“贝喜@”唐氏综合征产前筛查系统实验操作注意事项

蓝色字体为重点注意的问题,并且筛查实验必须完全基于孕母血清为中孕期(14~20周)的血清,并保证实验中的使用的一切仪器安全准确时,才可参考以下问题。以下问题的最终解释权归“复旦张江”所有,仅以以下问题引起实验操作注意,并进行交流。

问题和现象

原因

解决方法

一、








1 、加试剂造成污染

加液时最好悬空加入(高出板孔面 0.5cm )

2 、试剂、样品使用前未能平衡

使用前试剂样品置室温平衡 15 分钟左右

3 、恒温箱温度不足 37℃ (或水浴锅温度不足 37℃ )

孵育反应期间检察并控制好温度

4 、移液器吸量不足,吸头内壁挂液太多或本身吸头不清洁

校正移液器,吸头要配套,每次装吸头要牢固,吸头一次性使用

5 、孵育反应时间不足

准确计时

6 、人工洗板时冲击力太大,洗涤液浸泡时间太长,

洗涤次数增加

减少洗涤冲击力,按说明书要求的时间浸泡,准确记住洗涤次数,并戴手套洗板

7 、试剂滴加量不足或顺序颠倒

加显色液时,先加显色剂 A ,后加显色剂 B ,注意加入量的准确性

8 、显色剂反应时间不足

试剂盒显色反应时间精确 30 分钟

9 、显色反应避光不佳

使用专门的暗格进行显色反应

二、





1 、加试剂造成污染

加液时悬空加入(高出板孔 0.5cm )

2 、样品体积多少不一,加样时间的长的短

重复某一样品尽可能与第一次接近,平行的孔内的加样操作应保持一致

3 、样本加入后未混匀

加完样后要轻轻振荡并在桌上做圆周运动以混匀

4 、测量波长不对

按说明书严格操作

5 、酶标仪重复性差

校对酶标仪

6 、操作过程中个别孔液体外溅

稳拿稳放,小心混匀,防止外溅

7 、不同批号试剂盒中组分混淆

不同批号试剂不能混用

8 、瓶盖相互交叉使用

不同组分的瓶盖不能混用(特别是标准品)

9 、洗涤不正确

尽量用洗板机洗涤。手洗时应戴上手套,尽量避免交叉污染,

10 、孵育条件不一致(如:一次用水浴,一次用恒温箱)

水浴温育较恒温箱显色深,最好采用水浴,恒温箱的温度应控制在 37℃

11 、其它杂物掉入孔内、不慎多加或少加试剂

用记号笔圈上便于分析、多加时显色深,少加则浅

12 、操作人员不一致

最好是一人操作或熟练人员操作

13 、加样量不一致

尽可能使用同一移液器和装紧吸头

14 、加试剂前未混匀

加试剂前请混匀试剂

三、












1 、终止液当显色剂使用或终止液误作洗涤液稀释

每次配置时均应看清标签标明物质

2 、洗涤液配置时有误

仔细阅读说明书,按说明书配置

3 、漏加抗体或酶

注意不要漏加

4 、试剂未平衡,产生气泡

从冰箱中取出试剂至少平衡 15min 再进行实验

5 、试剂过有效日期

更换试剂盒

6 、试剂失效(有效期内)

请查看试剂的有效期限,与我公司联系

7 、读数与理论值相差较大

对试剂和血清进行稀释时可能稀释的浓度不对,请检查稀释浓度

8 、加样时孔内产生气泡

使用加样枪加样时,请仅使用第一档,以防止气泡产生

四、






1 、显色剂受光照时间较长,或污染

使用中注意避光,避免交叉污染

2 、整批样品放置时间过长,样品污染

样品保持新鲜,或低温保存,防止污染

3 、洗涤不充分,样品中其它成分残留,或酶残留

按说明书充分洗涤

4 、酶结合物反应时间或底物显色时间超过较多

按说明书所规定的时间内操作

5 、加量过多

加酶前检察移液器调节是否准确

6 、吸头重复使用,未洗净或消毒不完全而用于加酶或显色剂

吸头尽一次性使用

五、




1 、手工洗板失败,洗液在洗板时被吸头污染

加液时最好悬空加入(高出板孔 0.5cm )

2 、洗板后未立即进行下一步操作

洗板后立即进行下一步操作,不要中断实验去从事其它事情

3 、板孔内试剂时未能充分混匀(如:显色过程)

加完样后要轻轻振荡并在桌上做圆周运动以混匀


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