问题和现象 |
原因
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解决方法
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一、
显
色
淡
灵
敏
度
低
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1 、加试剂造成污染
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加液时最好悬空加入(高出板孔面 0.5cm )
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2 、试剂、样品使用前未能平衡
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使用前试剂样品置室温平衡 15 分钟左右
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3 、恒温箱温度不足 37℃ (或水浴锅温度不足 37℃ )
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孵育反应期间检察并控制好温度
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4 、移液器吸量不足,吸头内壁挂液太多或本身吸头不清洁
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校正移液器,吸头要配套,每次装吸头要牢固,吸头一次性使用
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5 、孵育反应时间不足
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准确计时
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6 、人工洗板时冲击力太大,洗涤液浸泡时间太长,
洗涤次数增加
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减少洗涤冲击力,按说明书要求的时间浸泡,准确记住洗涤次数,并戴手套洗板
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7 、试剂滴加量不足或顺序颠倒
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加显色液时,先加显色剂 A ,后加显色剂 B ,注意加入量的准确性
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8 、显色剂反应时间不足
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试剂盒显色反应时间精确 30 分钟
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9 、显色反应避光不佳
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使用专门的暗格进行显色反应
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二、
重
复
性
差
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1 、加试剂造成污染
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加液时悬空加入(高出板孔 0.5cm )
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2 、样品体积多少不一,加样时间的长的短
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重复某一样品尽可能与第一次接近,平行的孔内的加样操作应保持一致
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3 、样本加入后未混匀
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加完样后要轻轻振荡并在桌上做圆周运动以混匀
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4 、测量波长不对
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按说明书严格操作
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5 、酶标仪重复性差
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校对酶标仪
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6 、操作过程中个别孔液体外溅
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稳拿稳放,小心混匀,防止外溅
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7 、不同批号试剂盒中组分混淆
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不同批号试剂不能混用
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8 、瓶盖相互交叉使用
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不同组分的瓶盖不能混用(特别是标准品)
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9 、洗涤不正确
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尽量用洗板机洗涤。手洗时应戴上手套,尽量避免交叉污染,
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10 、孵育条件不一致(如:一次用水浴,一次用恒温箱)
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水浴温育较恒温箱显色深,最好采用水浴,恒温箱的温度应控制在 37℃
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11 、其它杂物掉入孔内、不慎多加或少加试剂
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用记号笔圈上便于分析、多加时显色深,少加则浅
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12 、操作人员不一致
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最好是一人操作或熟练人员操作
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13 、加样量不一致
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尽可能使用同一移液器和装紧吸头
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14 、加试剂前未混匀
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加试剂前请混匀试剂
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三、
出
现
白
板
或
吸
光
度
值
很
低
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1 、终止液当显色剂使用或终止液误作洗涤液稀释
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每次配置时均应看清标签标明物质
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2 、洗涤液配置时有误
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仔细阅读说明书,按说明书配置
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3 、漏加抗体或酶
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注意不要漏加
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4 、试剂未平衡,产生气泡
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从冰箱中取出试剂至少平衡 15min 再进行实验
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5 、试剂过有效日期
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更换试剂盒
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6 、试剂失效(有效期内)
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请查看试剂的有效期限,与我公司联系
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7 、读数与理论值相差较大
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对试剂和血清进行稀释时可能稀释的浓度不对,请检查稀释浓度
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8 、加样时孔内产生气泡
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使用加样枪加样时,请仅使用第一档,以防止气泡产生
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四、
全
部
都
有
色
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1 、显色剂受光照时间较长,或污染
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使用中注意避光,避免交叉污染
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2 、整批样品放置时间过长,样品污染
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样品保持新鲜,或低温保存,防止污染
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3 、洗涤不充分,样品中其它成分残留,或酶残留
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按说明书充分洗涤
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4 、酶结合物反应时间或底物显色时间超过较多
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按说明书所规定的时间内操作
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5 、加量过多
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加酶前检察移液器调节是否准确
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6 、吸头重复使用,未洗净或消毒不完全而用于加酶或显色剂
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吸头尽一次性使用
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五、
出
现
花
板 |
1 、手工洗板失败,洗液在洗板时被吸头污染
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加液时最好悬空加入(高出板孔 0.5cm )
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2 、洗板后未立即进行下一步操作
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洗板后立即进行下一步操作,不要中断实验去从事其它事情
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3 、板孔内试剂时未能充分混匀(如:显色过程)
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加完样后要轻轻振荡并在桌上做圆周运动以混匀
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